正确使用384合成仪的步骤如下:
1.准备工作
检查试剂与耗材:确保合成仪上所有试剂瓶中的试剂量充足,如保护碱基的5/—DMT、A、G、C、T亚磷酰胺单体、四唑偶联催化剂、乙酐、N—甲基咪唑封闭试剂、三氯乙*(TCA)脱保护溶液、12氧化混合物、乙腈清洗溶剂、氨水切除溶液等,必要时更换试剂瓶。同时准备好足够数量的清洁收集瓶,并标记好用于收集产物。
检查设备状态:仔细检查合成仪的各个部件是否完好无损,包括压力系统、试剂和溶剂储液瓶、压力管路及输送管路、输送阀块、柱子、路节流阀、废液和排气系统等是否正常工作。确保仪器的密封性能良好,避免在合成过程中出现漏气等问题影响合成效率和质量。
2.设置合成参数
输入DNA序列:将要合成的DNA序列准确无误地输入到合成仪中。
选择合成步骤:根据合成需求选择合适的合成步骤,并检查所选步骤是否正确。
确定结束方法:如果打算以5,—DMT基团连接纯化寡核苷酸,将结束方法设置为TritylOnAuto;否则,保持仪器的原始状态TritylOffAuto。
输入保存名字:在每个柱监视器的Username下,输入希望保存的名字,以便后续对合成产物进行识别和管理。
标记收集瓶:以代码代替相应的DNA序列标记每一个收集瓶,确保收集瓶与合成产物的对应关系准确无误。
3.384合成仪运行前的检查与准备
打印与核对资料:打印出每一个柱设置的详细资料,并仔细检查打印出来的资料是否正确,确保所有设置符合预期。
检查柱位置:运行StartColumn步骤检查每一个柱的位置,确保合成仪上合成柱处于正确的位置。
检查废液瓶:查看连接在合成仪上的溶剂残留(废液瓶)是否已满,若已满则及时清理或更换废液瓶,以免影响合成过程。
准备分部收集器:如果使用分部收集器收集每个DMT脱保护步骤的流出物,要确保试管充分清洁干净,并打开分部收集器,保证DMT废液管路通向分部收集器。
4.启动合成程序
清洗试剂管路:启动循环,运行开始程序清洗试剂管路,除去原来残留的试剂,为新的合成反应做好准备。
开始合成反应:确认各项准备工作就绪后,正式启动合成程序,在合成过程中密切关注仪器的运行状态,如有异常及时处理。
https://www.chem17.com/st440201/product_36554610.html
http://www.biolytic-cn.com/Products-36554610.html