D-荧光素钾盐使用方法：
A．体外生物发光检测
1储存液制备用蒸馏水溶解D-荧光素钾盐，配制成15mg/ml的储存液（100×），混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。建议使用的工作液浓度为150?g/ml（相当于468?M）。
2荧光素酶反应缓冲液制备配方【1×，参考Yuichi Oba, et al., 2003】：100mM Tris-HCl（pH 7.8），5mM MgCl2，250?M CoA，150?M ATP。具体缓冲液组成可参考其他文献资料来调整。按照以上配方制备荧光素酶反应缓冲液（2×）。
3收集细胞裂解上清（荧光素酶表达）根据需要检测的细胞类型，选择合适的裂解液进行细胞裂解，离心收集上清后续检测待用。
4萤火虫荧光信号检测
【注①】：萤火虫荧光信号的检测方法大体上取决于冷光测定仪（luminometer）类型（是手动型荧光计、单管注射型或者酶标板读数型荧光计）。根据特定发光测定仪，来考虑注射用量和程序设置。
【注②】：需设置不含荧光素酶的孔（用作阴性对照），以测定背景荧光。
例：注射式冷光测定仪（injectible luminometer，单样或微孔板，200?l终体积）。
a吸取100?l荧光素酶反应缓冲液（2×）到一干净的冷光测定仪比色皿或96孔板的各孔（z好使用全白平底的96孔板）；
b吸取50~98?l裂解上清到皿或孔内；
c如果有需要，用水来补足使得总体积到198?l；
d设置程序注射2?l荧光素储存液（使工作浓度150?g/ml），程序：2~5秒延迟（delay），之后10s测定。
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