PI细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。细胞周期是一个重要的检测参数,研究细胞周期变化的影响对于肿瘤的发展及药物研发有着重要的作用。例如,已知抑制有丝分裂的化合物大都用来减缓肿瘤细胞的生长。
PI细胞周期检测步骤:
1.细胞样品的准备:
收集细胞,用1ml预冷PBS洗1遍,轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。
2.细胞固定:
加入1ml预冷的70%乙醇中,轻轻吹打混匀,4度固定2小时或更长时间(固定12-24小时可能效果更佳)。1000g离心3-5分钟,沉淀细胞(如果细胞沉淀不充分,可以适当延长离心时间或加大离心力)。弃上清,用用1ml预冷PBS洗1遍。
3.PI染色:
每个样品用0.5ml染色缓冲液(或PBS)重悬,加入25ulPI染色液(20×)、10ulRNaseA(50×)。37度避光温浴30分钟。
4.流式检测:
用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光,同时检测光散射情况。采用分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。
PI细胞周期
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